溶液中待測物分子中的價電子能夠選擇性地吸收紫外或可見光，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，形成紫外可見吸收光譜，根據(jù)紫外可見吸收光譜中的吸收峰和摩爾吸收系數(shù)，進行定性分析。這就是化學(xué)試劑分子吸收的測定方法——分光光度法，本文對這種方法進行了詳細介紹。

1. 吸收曲線法

使用自動記錄型儀器時，可自動掃描繪出吸收曲線。

使用非自動記錄型儀器時，在規(guī)定的波長范圍時，每隔5nm~10nm測定一次吸光度，在吸收峰附近時，應(yīng)每隔1nm~2nm測定一次，以波長為橫坐標，相應(yīng)的吸光度為縱坐標，繪制吸收曲線。

此方法可適用于定性分析、最大吸收波長的測定。

2. 工作曲線法

按產(chǎn)品標準的規(guī)定配制四個以上濃度成適當比例的標準溶液，以空白溶液（或溶劑）為參比溶液，同時用空白溶液（或溶劑）的吸光度進行校正。在規(guī)定波長下，分別測定吸光度。以標準溶液濃度c為橫坐標，相應(yīng)的吸光度A為縱坐標，繪制工作曲線，同時配制適當濃度的樣品溶液，在上述條件下測定吸光度，并在工作曲線上查出待測物濃度（圖1），待測物的濃度應(yīng)在工作曲線范圍內(nèi)。該溶液濃度也可根據(jù)測定的吸光度用回歸方程法計算。此方法適用于雜質(zhì)含量的測定。

3. 分光光度法含量測定

按產(chǎn)品標準給出的方法測定。特效試劑可在規(guī)定條件下與被測物生成有色配位化合物，測定其溶液的吸光度，按標準中給出的換算系數(shù)計算含量，也可用標準樣品對照法進行計算；某些酸堿指示劑可采用柱層析法將雜質(zhì)分離后測主體溶液的吸光度，用標準對照法計算含量。

4. 摩爾吸收系數(shù)測定

按產(chǎn)品標準的規(guī)定條件測定。

摩爾吸收系數(shù)E，數(shù)值以L/（cm*mol）表示，按式（2）計算：

式中：

A——吸光度的數(shù)值；c——被測物的物質(zhì)的量濃度的數(shù)值，單位為摩爾每升（mol/L）；b—光路長度（即吸收池厚度）的數(shù)值，單位為厘米（cm）。

5. 靈敏度測定

按產(chǎn)品標準規(guī)定條件測定。靈敏度可用摩爾吸收系數(shù)表示。

6. 質(zhì)量吸收系數(shù)測定按產(chǎn)品標準的規(guī)定條件測定。

質(zhì)量吸收系數(shù)a，數(shù)值以L/（cm*g）表示，按式（3）計算：

A——吸光度的數(shù)值；

p——被測物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為克每升（g/L）；

b——光路長度（即吸收池厚度）的數(shù)值，單位為厘米（cm）。